1. 为什么要去除重复？
在建库测序后， 加上接头的DNA片段进行PCR扩增（由于连接flowcell的效率很低，所以需要对片段进行扩增），连接至flowcell上。PCR扩增会导致一个片段会测序多次，当该片段存在变异位点时，如果不去除重复片段则会增加该位点的测序深度，会被分析为真的变异位点，从而增加假阳性率。
2. 去除PCR重复方法
使用工具：samtools和picard （已被整合至GATK中，本人使用版本4.2）
2.1 利用FLAG值去除重复
-F参数1024表示过滤PCR重复或光学重复reads，具体FLAG含义参考本人以下文章：
生信分析进阶4 - 比对结果的FLAG和CIGAR信息含义与BAM文件指定区域提取
# f提取，F过滤
samtools view -F 1024 - h sample.bam > sample.rmdup.bam
2.2 利用samtools rmdup标记或去除重复
# 去除重复
samtools rmdup sample.bam sample.rmdup.bam
# 只标记重复，不去除
samtools markdup sample.bam sample.markdup.bam
# 标记重复后去除重复
samtools markdup -r sample.bam sample.markdup.bam
2.3 利用gatk MarkDuplicate 标记或去除重复
# 标记重复
gatk MarkDuplicate I=sample.sorted.bam O=sample.mkdup.bam M=metrics.txt
# 标记后去除重复
gatk MarkDuplicate REMOVE_DUPLICATES I=sample.sorted.bam O=sample.mkdup.bam M=metrics.txt
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