FLUOR DE LYS® HDAC fluorometric activity assay kit组蛋白去乙酰化酶荧光活性检测试剂盒

目前，组蛋白去乙酰化酶抑制剂已经显示出其作为抗肿瘤药物的前景，这也自然激发了研究者们对于筛选HDAC（Histone deacetylase，组蛋白去乙酰化酶）抑制化合物的兴趣。Enzo的FLUOR DE LYS®HDAC荧光活性检测试剂盒（货号：BML-AK500-0001）是一种灵敏、便捷的组蛋白去乙酰化酶检测试剂盒，可替代使用传统的放射性标记的乙酰化组蛋白和肽/HPLC法检测组蛋白去乙酰化酶的方案。

FLUOR DE LYS®去乙酰化酶检测平台是Enzo的升级酶活性检测系列产品的基础，其中的产品就包括用于筛选HDAC（组蛋白去乙酰化酶）活性调节剂和Sirtuin（长寿蛋白，一种去乙酰化酶）活性调节剂的试剂盒。Enzo还可提供基于荧光共振能量转移（FRET）的试剂盒，用以检测基质金属蛋白酶（MMPs）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（Caspase）的活性，以及提供基于磷酸特异性抗体的激酶检测试剂盒。

这些检测证明了Enzo在组装小肽、合成活性重组蛋白、荧光标记和检测技术，以及抗体开发等多方面协同的能力，也保障了Enzo能够生产出功能强大且重复性好的检测试剂盒。

Enzo的酶活性检测试剂盒均具有以下特点：

高品质：高活性、高纯度的重组酶，可呈现高质量的底物结合效果

灵活性：批量酶和底物可用于筛选后研究

强创新：多种readout 格式的专利底物/显影剂化学物质

作用机制：

FLUOR DE LYS® HDAC fluorometric activity assay kit基于Enzo特有的 FLUOR DE LYS®（荧光法组蛋白去乙酰化酶-赖氨酸）底物和显影剂组合，只需2步简单的混合步骤，即可在同一个96 孔板上进行检测。首先，将含有乙酰化赖氨酸侧链的FLUOR DE LYS®底物与含有HDAC活性的样品（HeLa核或其他提取物、纯化酶、珠结合免疫复合物等）一起孵育。底物的去乙酰化会使底物增敏，所以在第二步中，将其与FLUOR DE LYS®显影剂混合后会产生荧光团。

该检测方法目前已经成功用于所有已知的I类HDAC——HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8（见产品数据表）和II 类HDAC 4-7、9和10，以及人类Sir2同源物和SIRT1（见产品数据表）的制备。Enzo Life Sciences的研究表明，FLUOR DE LYS®底物具有细胞渗透性，并可在原位被细胞HDAC去乙酰化。脱乙酰化的底物在细胞内积聚后，可通过向细胞裂解液中加入FLUOR DE LYS®显影剂进行定量测定。

Figure 1. HDAC荧光活性检测的反应方案。底物去乙酰化使其对显影剂敏感，从而产生荧光团（symbol）。荧光团可被360 nm的光激发，并发射出460 nm的光，发射光在荧光平板阅读器上可被检测到。

产品特点：

使用提供的核提取物，有助于检测裂解物、免疫沉淀物以及筛选抑制剂；

含有HeLa核提取物，作为HDAC 1和2的丰富来源，可用作阳性对照，也可用作筛选HDAC活性的来源；

与I & IIb类HDAC和Sirtuin兼容（添加NAD+）；

无放射性，没有提取步骤；

所提供的试剂足够分析100-200次。

产品信息：

产品货号	BML-AK500-0001
产品名称	FLUOR DE LYS® HDAC fluorometric activity assay kit /欣博盛生物
规格	1*96wells
使用/稳定性	Store all components, except the microtiter plate, at -80℃ for the highest stability. The HeLa Nuclear Extract, BML-KI140, must be handled with particular care in order to retain maximum enzymatic activity. Defrost it quickly in a RT water bath or by rubbing between fingers, then immediately store on an ice bath. The remaining unused extract should be refrozen quickly, by placing at -80°C. If possible, snap freeze in liquid nitrogen or a dry ice/ethanol bath. To minimize the number of freeze/thaw cycles, aliquot the extract into separate tubes and store at -80℃. The FLUOR DE LYS® Substrate, BML-KI104, when diluted in Assay Buffer, may precipitate after freezing and thawing. It is best, therefore, to dilute only the amount needed to perform the assays of that day.
运输	Dry Ice
长期保存	-80℃
试剂盒组分	Nuclear Extract from HeLa Cells (human cervical cancer cell line) (Prod. No. BML-KI140-0100) (100 µl; In 0.1M KCl, 20mM HEPES/NaOH, pH 7.9, 20% (v/v) glycerol, 0.2mM EDTA, 0.5mM DTT, 0.5Mm PMSF, prepared according to a modification of J.D. Dignam et al. (1983) and S.M. Abmayr et al. (1988)). Storage: -80℃, avoid freeze/thaw cycles FLUOR DE LYS® Substrate (Prod. No. BML-KI104-0050) (50 µl; 50mM in DMSO) Storage: -80℃ FLUOR DE LYS® Developer Concentrate (20×) (Prod. No. BML-KI105-0300) (300 µl; 20×stock solution, dilute in assay buffer before use) Storage: -80℃ Trichostatin A (HDAC Inhibitor) (Prod. No. BML-GR309-9090) (100 µl; 0.2mM in DMSO) Storage: -80℃ FLUOR DE LYS® Deacetylated Standard (Prod. No. BML-KI142-0030) (30 µl; 10mM in DMSO) Storage: -80℃ HDAC Assay Buffer (Prod. No. BML-KI143-0020) (20 ml; 50mM TRIS/Cl, pH 8.0, 137mM NaCl, 2.7mM KCl, 1mM MgCl2) Storage: -20℃ 1/2 volume microplate (Prod. No. BML-KI101) Storage: Ambient 1/2 volume white microplate (Prod. No. BML-K571) Storage: Ambient

产品最新引用文献：

The activation of histone deacetylases 4 prevented endothelial dysfunction: A crucial mechanism of HuangqiGuizhiWuwu Decoction in improving microcirculation dysfunction in diabetes: M. Chen, et al.; J. Ethnopharmacol. 307, 116240 (2023), Abstract;

Four New Anthraquinones with Histone Deacetylase Inhibitory Activity from Ventilago denticulata Roots: N. Hangsamai, et al.; Molecules 27, 1088 (2022), Abstract;

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