噬菌体展示抗体库构建的途径:目前主要有两种:一是有机合成法,二是基因合成法。前者是直接合成含有各种可能序列的短肽,构建至噬菌体载体。基因工程方法是将目的基因构建至载体,与噬菌体的pⅢ外壳蛋白融合表达。
卡梅德生物在噬菌体展示技术研究多年,我们的构建的噬菌体抗体库涵盖了多种文库类型,可以分为随机肽库、免疫库、天然库等。接着我们将重点介绍噬菌体抗体库技术中涉及到的噬菌体抗体库,主要有三种类型: scFv库(由VH和VL组成,并由一个小肽(Gly4Ser)3连接成一个单链多肽)、Fab库(含有VH-CH,VL-CL,并由二硫键连接在一起)和VHH库(只有重链可变区)。
(1)随机肽库 将化学合成的随机寡核苷酸序列与噬菌体的表面蛋白基因融合,在噬菌体表面表达出各种氨基酸组合的随机序列短肽。噬菌体展示随机肽库按大小不同可以分为六肽库、九肽库和十二肽库;按结构不同可以分为:线性和非线性肽库;按特殊目的可以分为:偏性肽库和突变肽库等。
(2)免疫库 免疫库由经过免疫后的供体B 淋巴细胞的抗体基因构建。(3)天然库 不用免疫动物。抗体均来源于人类,完全的人源化抗体,但亲和力通常较低。
噬菌体抗体库技术的优势:
噬菌体展示技术可对人和其他动物的B细胞抗体库进行体外建库筛选,避开了免疫和细胞融合等步骤从而缩短实验周期并增加了稳定性,该技术还具有筛选容量大、可发酵大量主产、方法简单等优点。 抗体库一旦建成,不需要反复免疫和建库,可以永久使用,允许反复筛选,且不再需要对每个抗体基因进行单克隆筛选,直接进行转化。
图1 三种技术比较流程
噬菌体展示抗体库筛选应用:
噬菌体展示文库技术是一种新兴的生物技术,利用噬菌体展示技术获得的外源蛋白保持独立的空间结构和生物活性。在生物医学研究、生物制药和生物技术领域有广泛的应用。主要应用领域:抗体工程,肽和蛋白质工程,药物发现和开发,蛋白质互作,新型疫苗的研制,抗原表位分析,诊断工具和生物传感器等领域得到了广泛的应用,并显示了良好的应用前景。
参考资料:
【1】www.kmdbioscience.cn/pages/shijuntizhanshi.html
【2】www.kmdbioscience.cn/pages/shijuntizhanshikaifapingtai.html
【3】www.kmdbioscience.cn/pages/wenkushaixuanpingtai.html